PPGO/CCBS

Uma banca de DEFESA de DOUTORADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: TANIA MARA LOPES ORTIZ MONTEIRO
DATA: 28/03/2024
HORA: 14:00
LOCAL: Google Meet
TÍTULO: Estudo sobre quantificação relativa de bactérias do biofilme lingual de crianças sob ventilação mecânica invasiva
PALAVRAS-CHAVES: Biofilme, Ventilação Mecânica, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella pneumoniae, UTI Pediátrica, PCR em tempo real, Pneumonia Associada a Ventilação Mecânica, Higiene Bucal.
PÁGINAS: 116
GRANDE ÁREA: Ciências da Saúde
ÁREA: Odontologia
RESUMO: O biofilme lingual de pacientes internados em Unidade de Terapia Intensiva (UTI) sob ventilação mecânica invasiva (VMI), pode abrigar patógenos respiratórios, possibilitando a translocação bacteriana do meio bucal para os pulmões via tubo orotraqueal, causando infecções sistêmicas graves, como a Pneumonia Associada a Ventilação Mecânica (PAV), repercutindo nos dias de hospitalização e dias em VMI. A colonização do biofilme lingual por patógenos ocorrem a partir de 48 horas após a intubação do paciente, podendo estar relacionada à higienização oral inadequada. Os microorganismos envolvidos incluem bactérias gram- negativas tais como: Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumonia. A multiplicação desses patógenos ocorre devido a falha no sistema de defesa dos pacientes em VMI, de forma que pacientes infectados por esses patógenos multirresistentes tem os piores desfechos com maior mortalidade. Estudos tem mostrado que a execução de um Protocolo de Higiene Bucal é um instrumento eficaz na diminuição da quantificação relativa de bactérias do biofilme lingual de crianças intubadas em UTI e na redução significativa nos dias de uso da ventilação mecânica invasiva. A hipótese dessa Tese é que a multiplicação de bactérias totais no biofilme lingual de crianças sob ventilação mecânica invasiva e a frequência dos patógenos Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumoniae nesse biofilme lingual, podem variar de acordo com desfechos hospitalares, higiene bucal, presença de PAV, dias de hospitalização e dias sob VMI em UTI Pediátrica. O capítulo I desta tese foi o artigo original “Quantificação relativa de Pseudomonas aeruginosa e Kleibsiela pneumoniae no biofilme lingual de crianças sob ventilação mecânica invasiva e sua associação com desfecho hospitalar em Unidade de Terapia Intensiva” com objetivo de investigar associação entre a quantidade de patógenos Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumoniae no biofilme lingual de crianças sob ventilação mecânica invasiva e desfecho hospitalar (alta e óbito) em UTI Pediátrica. Trata-se de um coorte conduzida com 24 pacientes em VMI, de ambos sexos, com idade de 1 a 144 meses. A coleta do biofilme lingual ocorreu: no momento da intubação (T1) e 48 horas depois da primeira coleta (T2). Foi realizada extração do DNA das amostras e, para detecção do DNA das bactérias específicas, utilizou-se um par de primer bacteriano para Pseudomonas aeruginosa e um par de primer bacteriano para Klebsiella pneumoniae. A qPCR (Reação em Cadeia de Polimerase) em Tempo Real permitiu a quantificação relativa das bactérias detectadas e amplificadas em cada ciclo da reação. A curva Ct (threshold cycle) indica o número do ciclo fracionário em que a quantidade de alvo amplificado atinge um limiar fixo. Os níveis de Ct são inversamente proporcionais à quantidade de ácido nucleico alvo na amostra (ou seja, quanto mais baixo o nível Ct, maior é a quantidade de ácido nucleico/mais bactérias). O ∆Ct (delta Ct) consiste na diferença de expressão entre o alvo e o controle da amostra (média de Pseudomonas aeruginosas ou Klebsiella pneumoniae – média do primer bacteriano universal 16S) sendo que o ∆Ct positivo indica menos bactérias e o ∆Ct negativo, maior quantidade de bactérias. Os resultados foram analisados com base no método de quantificação dos dados da qPCR, o ∆∆Ct (delta delta Ct), que é a diferença entre ∆CtT2 e ∆CtT1, resultando na variação quantitativa das bactérias de cada amostra. Observou-se que ao testar a associação entre a presença dos patógenos avaliados nos tempos de estudo com a presença ou ausência de sinal clínico de biofilme lingual, não se observou associações significantes. A associação da presença dos patógenos Pseudomonas aeruginosa e Klebsiella pneumoniae no biofilme lingual de crianças sob VMI com desfecho hospitalar alta (15 pacientes) e óbito (9 pacientes) dentro dos tempos de estudo T1 e T2, revelou que em T2, o percentual de Pseudomonas aeruginosa presentes no biofilme lingual dos pacientes que foram a óbito foi estatisticamente mais elevado que nos pacientes que receberam alta hospitalar (90% versus 10%; P = 0,033). Ao analisar a quantidade dos patógenos no biofilme lingual das crianças sob VMI, não foram identificadas diferenças significativas entre os grupos alta e óbito, uma vez que não variou a quantidade de bactérias (Pseudomonas aeruginosas e Klebsiella pneumoniae) quanto ao desfecho hospitalar. A regressão logística multivariada da associação da presença dos patógenos no biofilme lingual de crianças intubadas, ajustada para idade e tempo sob VMI sobre a ocorrência de óbito, reforçou que a presença de Pseudomonas aeruginosa no biofilme lingual em T2 foi associada com o desfecho óbito mesmo depois de ajustados para os demais fatores de confusão (OR ajustado = 39,2% ; IC95% = 1,07-1485; P = 0,048). Conclusão: A presença da Pseudomonas aeruginosa no biofilme lingual de crianças sob VMI parece mais importante do que a sua quantidade para associação com óbito em UTI Pediátrica. Implicações práticas: Contribuições para cuidados de saúde, salientando a importância de estudos focados na presença bacteriana no biofilme lingual de crianças sob VMI em UTI Pediátrica para traçar estratégias de saúde pública visando seu controle. O capítulo II desta tese foi o artigo “Quantificação relativa de bactérias totais no biofilme lingual de crianças intubadas em Unidade de Terapia Intensiva, higiene bucal, desfecho hospitalar, dias de hospitalização, dias sob ventilação mecânica invasiva e Pneumonia Associada a Ventilação Mecânica: existe associação?” com objetivo de investigar se existe associação entre quantificação relativa de bactérias totais do biofilme lingual de crianças intubadas em UTI, higiene bucal, desfecho hospitalar, dias de hospitalização, dias sob Ventilação Mecânica Invasiva e Pneumonia Associada a Ventilação Mecânica. Trata-se de uma coorte conduzida com 24 pacientes em VMI, ambos sexos e idade de 1 a 144 meses. A coleta do biofilme lingual ocorreu: no momento da intubação (T1) e 48 horas depois da primeira coleta (T2). Foi realizada extração do DNA das amostras e utilizado um par de primer bacteriano universal 16S para detecção do DNA das bactérias totais presentes nessa amostra. A qPCR (Reação da Cadeia de Polimerase) em Tempo Real permitiu a quantificação relativa das bactérias detectadas e amplificadas em cada ciclo da reação. A curva Ct (threshold cycle) indica o número do ciclo fracionário em que a quantidade de alvo amplificado atinge um limiar fixo. Os níveis de Ct são inversamente proporcionais à quantidade de ácido nucleico alvo na amostra (ou seja, quanto mais baixo o nível Ct, maior é a quantidade de ácido nucleico/mais bactérias). O ∆Ct (delta Ct) consiste na diferença de expressão entre o alvo e o controle da amostra (Média CtT2 – Média CtT1) sendo que o ∆Ct positivo indica menos bactérias e o ∆Ct negativo, maior quantidade de bactérias. ∆∆Ct (delta delta Ct) é a diferença entre ∆CtT2 e ∆CtT1, resultando na variação quantitativa das bactérias de cada amostra. Os resultados foram analisados com base no método de quantificação dos dados da qPCR, o método Ct, sendo possível observar que no biofilme coletado, a média Ct para quantificação relativa de bactérias do biofilme lingual foi menor (25,15±6,17) em T1 (menor Ct=mais bactérias) enquanto que a média foi maior (27,23±5,61) em T2 (maior Ct=menos bactérias) (Teste t-pareado, p= 0,0394), revelando significativa diminuição na quantificação de patógenos do biofilme lingual após a execução do Protocolo de Higiene Bucal (PHB). A média da quantidade de bactérias totais no biofilme lingual da amostra total do estudo, foi dividida de acordo com o desfecho da internação hospitalar (alta e óbito), por meio da quantificação relativa através do método ∆∆Ct. Observou-se menor expressão relativa de bactérias totais nas crianças que tiveram alta (73.093) que aquelas que vieram a óbito (114.380), revelando tendência destas últimas apresentarem maior colonização de bactérias totais no biofilme lingual, apesar de não haver diferença significativa entre os grupos (p>0,05, Teste de Mann-Whitney). Os resultados mostraram correlação negativa (inversa) entre ∆Ct e quantidade de dias de hospitalização (r = -0,279; P = 0,185), porém sem diferença estatística. Bem como diferença estatística na correlação negativa entre ∆Ct e quantidade de dias em VMI (r = -0.422 e p= 0,040), com magnitude moderada e coeficiente de determinação (r2 ) de 0,178, revelando que a maior quantidade dos participante (∆Ct positivo=menos bactérias) com maior controle do biofilme lingual ficaram menos tempo em VMI, com variância compartilhada de 17,8%. A análise de regressão múltipla foi realizada para estimar o efeito do ∆Ct, ajustada para idade, sobre dias de hospitalização e dias em VMI. Não houve diferença significante entre ∆Ct e dias de hospitalização e a análise ajustada para a idade mostrou medida estatística limítrofe (coeficiente = -0,41, P = 0,053) para a relação entre ∆Ct e dias em VMI, indicando que não houve evidência suficientemente forte para provar a associação. Conclusão: A execução de um Protocolo de Higiene Bucal mostrou ser um instrumento eficaz na diminuição da quantificação de bactérias totais do biofilme lingual de crianças intubadas em Unidade de Terapia Intensiva, com menor quantificação relativa de bactérias totais no biofilme lingual das crianças que tiveram alta e tendência, das que foram a óbito, apresentarem maior colonização de bactérias totais neste biofilme. Os participantes com maior controle do biofilme lingual, (∆Ct positivo=menos bactérias), ficaram menos tempo em Ventilação Mecânica Invasiva. Desse modo, esses pacientes são mais beneficiados quando realizado o Protocolo de Higiene Bucal. Porém no presente estudo. não foi possível observar forte associação com dias de hospitalização. Implicações práticas: Contribuições para cuidados de saúde, salientando a importância do desenvolvimento e implementação de um PHB em uma UTI Pediátrica a fim de reduzir a quantificação relativa de bactérias do biofilme lingual de crianças intubadas e reduzir dias em ventilação mecânica invasiva.
MEMBROS DA BANCA:
Externo à Instituição - ANNA CLARA FONTES VIEIRA - IFPI
Interno - 1210245 - CECILIA CLAUDIA COSTA RIBEIRO DE ALMEIDA
Presidente - 4111411 - FERNANDA FERREIRA LOPES
Externo ao Programa - 432.344.883-04 - JOSELIA ALENCAR LIMA
Externo à Instituição - SIMONE SOUZA LOBÃO VERAS BARROS - UFPI