PPGCS/CCBS

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: JOÃO VICTOR CARVALHO
DATA: 14/05/2025
HORA: 14:00
LOCAL: https://meet.google.com/dcj-oiqa-dka
TÍTULO: IDENTIFICAÇÃO DE VARIANTES DE RISCO DO GENE APOL1 EM PORTADORES DE GLOMERULOPATIAS NO BRASIL.
PALAVRAS-CHAVES: APOL1; Bouin; Michel; Biópsia.
PÁGINAS: 73
GRANDE ÁREA: Ciências da Saúde
ÁREA: Medicina
RESUMO: A Doença Renal Crônica (DRC) representa um grave problema de saúde pública, frequentemente relacionada a glomerulopatias de curso progressivo. A identificação de variantes genéticas, como as do gene APOL1, tem sido fundamental para compreender a susceptibilidade e evolução dessas doenças, especialmente em populações de ancestralidade africana. O presente estudo teve como objetivo avaliar a qualidade e integridade do DNA genômico extraído de biópsias renais conservadas em diferentes meios (Michel, Bouin e formol) e investigar a presença das variantes G1 e G2 do gene APOL1 em pacientes atendidos no serviço de Nefrologia do LIME-HUUFMA. Foram utilizadas amostras parafinadas, frescas e congeladas, com extração de DNA realizada por protocolos específicos para cada tipo de conservação. A qualidade do DNA foi avaliada por espectrofotometria (A260/A280), eletroforese em gel de agarose e testes de amplificação por PCR. Os resultados demonstraram uma clara influência do meio de conservação sobre o rendimento e a pureza do material genético extraído. As amostras armazenadas em solução de Michel apresentaram os melhores parâmetros de purificação, com concentrações variando de 3,3 ng/μL a 200,7 ng/μL e razões A260/A280 entre 1,8 e 1,9, valores ideais para DNA puro. Essas amostras também apresentaram maior taxa de sucesso na amplificação por PCR, com bandas visíveis e bem definidas. Fragmentos maiores e oriundos da região cortical do rim contribuíram significativamente para a obtenção de DNA com melhor qualidade, devido à maior densidade celular.Por outro lado, as amostras fixadas em Bouin mostraram-se extremamente degradadas, com baixas concentrações, ausência de bandas na eletroforese e razões de pureza fora da faixa ideal. A presença de ácido pícrico e a ação prolongada do fixador resultaram em modificações químicas no DNA, comprometendo as etapas de extração e purificação. Os dados reforçam que a escolha do meio de conservação e a área de origem do fragmento são determinantes para a recuperação de DNA viável. A padronização de protocolos de coleta e conservação, com preferência por amostras embebidas em Michel, pode otimizar estudos moleculares, especialmente aqueles voltados à genotipagem de variantes como as do gene APOL1, com implicações diagnósticas e prognósticas relevantes.
MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 2046964 - GYL EANES BARROS SILVA
Interno - 7549183 - VANDA MARIA FERREIRA SIMOES
Externo ao Programa - 3603426 - DYEGO JOSE DE ARAUJO BRITO
Externo à Instituição - GISELE VAJGEL FERNANDES - UFPE