PPCA/CCCH

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE: LEDIA FEITOSA WANDERLEY
DATA: 21/11/2016
HORA: 09:00
LOCAL: Auditório do PPGCA
TÍTULO: Ação de uma protease do látex de Ficus benjamina L. sobre nematódeo e bactérias de interesse na produção animal.
PALAVRAS-CHAVES: Látex, Protease, Nematicida, Antimicrobiano, Pecuária.
PÁGINAS: 45
GRANDE ÁREA: Ciências Agrárias
ÁREA: Zootecnia
RESUMO: Helmintoses e infecções bacterianas são um grande desafio para a produção pecuária porque provocam perda de produtividade nos rebanhos. Para reduzir prejuízos, os produtores pecuários realizam o controle de parasitos principalmente utilizando produtos químicos sintéticos, mas a resistência aos princípios ativos desses produtos insta a busca contínua por moléculas biologicamente ativas. Essa pesquisa foi conduzida com o objetivo de obter frações proteicas, purificar e caracterizar uma protease a partir do látex de Ficus benjamina, além de avaliar uso potencial dessa proteína no controle do nematóide parasito de pequenos ruminantes, Haemonchus contortus, bem como sobre as bactérias patogênicas Salmonella enterica, Staphylococcus aureus e Enterobacter aerogenes. O látex foi obtido a partir de uma incisão feita no ápice do galho das plantas e coletado em tampão fosfato de sódio (75 mM, pH 7,0). O látex foi centrifugado (12.000 x g a 4 °C por 15 min), dialisado contra água (cut-off 12kDa), novamente centrifugado nas mesmas condições anteriores e, então, denominado EPL (extrato proteico do látex). O EPL foi fracionado com sulfato de amônio a 0-30%, 30-60% e 60-90% de saturação para a obtenção das frações denominadas F0-30, F30-60 e F60-90, respectivamente. A saturação 0-30% não precipitou proteínas. Os teores de proteína totais obtidos foram, respectivamente, 121,5, 21,2, 75,7 mg para EPL, F30-60 e F60-90. A atividade proteolítica das amostras proteicas foi mensurada pela hidrólise da azocaseína, com valores de 43.471, 13.245 e 57.857 UA/mL/mgP para EPL, F30-60 e F60-90, respectivamente. Por ter maior atividade proteolítica, a F60-90 foi fracionada por cromatografia de troca iônica em matriz de CMCellulose. A fração cromatográfica eluída com 50 mM de NaCl, denominada F50mM, teve atividade proteolítica de 36.379,8 UA/mL/mgP. A análise em gel mostrou que a F50mM tinha uma banda proteica com massa entre 20 e 30 kDa. A proteína foi identificada por espectrometria de massa como uma protease cisteínica com massa molecular de 23,97 kDa. Essa protease, denominada FbP, manteve atividade proteolítica estável na faixa de pH entre 6 e 10 e elevada atividade em uma ampla faixa de temperatura, com atividade ótima à 60 °C. Em testes de inibição do desenvolvimento larvar, as amostras proteicas EPL, F30-60, F60-90 e a FbP apresentaram IC50 de 0,22, 1,38, 0,42 e 0,26 mg.mL-1, respectivamente. O EPL e as frações F30-60 e F60-90 não inibiram o crescimento das bactérias testadas. A FbP exibiu efeitos inibitórios sobre o crescimento das bactérias S. aureus e S. enterica com mínima concentração inibitória (MIC) de 3,12 μg.mL-1, mas não sobre E. aerogenes. Conclui-se que o látex de F. benjamina possui uma protease cisteínica com propriedades biológicas promissoras para o desenvolvimento de produtos que possam ser utilizados no controle do nematóide gastrointestinal, H. contortus, e das bactérias patogênicas S. aureus e S. enterica.
MEMBROS DA BANCA:
Presidente - 1555662 - ALEXANDRA MARTINS DOS SANTOS SOARES
Externo à Instituição - DANILO RODRIGUES BARROS BRITO - IFMA
Interno - 1556449 - LIVIO MARTINS COSTA JUNIOR